HPLC同时测定复方芩兰口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量

HPLC同时测定复方芩兰口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量

刘耕文 刘超

黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，黑龙江 虎林 158400

摘要：目的：建立HPLC测定法同时测定复方芩兰口服液口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Waters Symmetry C18色谱柱( 150mm×4.6mm，5μm);流动相乙腈－0.05%磷酸为流动相；流速1.0mL.min-1；检测波长275nm，柱温30℃。结果：0.1～0.8mg.mL-1黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9967)、1～10μg.mL-1汉黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9994);黄芩苷平均加样回收率99.31%(ＲSD=0.44%)，汉黄芩苷平均加样回收率95.32%(ＲSD=1.20%)。结论：该方法简便、准确，可同时测定复方芩兰口服液中的黄芩苷、汉黄芩苷的含量，可作为复方芩兰口服液提升质量标准的参考依据。

关键词: 复方芩兰口服液;黄芩苷；汉黄芩苷;高效液相色谱法;含量测定;质量控制

复方芩兰口服液是由金银花、连翘、黄芩、板蓝根4味中药组成，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛^[1]。具有抗菌、抗病毒、抗炎活性的有效成分主要是黄芩中的黄芩苷、汉黄芩苷^［2-5］。现行质量标准中仅对处方中主要药味黄芩仅检测黄芩苷含量，未检测汉黄芩苷含量^［6-8］，可为该制剂的质量控制及标准修订提供参考。

1.仪器与试药

赛默飞U3000型高效液相色谱仪、Waters Symmetry C18色谱柱。黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110715-201821);汉黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:112002-201501);复方芩兰口服液(黑龙江珍宝岛制药股份有限公司，批号:S200628-3～-5);磷酸(国药集团化学试剂有限公司);甲醇为色谱纯(欧姆尼);乙腈为色谱纯(欧姆尼);水为超纯水;其余试剂为分析纯。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),流动相乙腈-0.05%磷酸(30∶70),流速1.0mL·min^-1,检测波长275nm^{[ 4]},进样量10μL,柱温30℃。

2.2 对照品溶液的制备

称取汉黄芩苷对照品约2.5mg,精密称定,置于200mL的量瓶中,加甲醇至刻度,作为汉黄芩苷对照品储备液，称取黄芩苷对照品约10mg,精密称定,置于10mL的量瓶中,加汉黄芩苷对照品储备液至刻度,作为混合对照品储备液，精密量取混合对照品储备液2mL，置于5mL的量瓶中,加甲醇至刻度，作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品1mL,置于50mL的量瓶中,加甲醇至刻度,作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2项下”对照品储备液1、2、4、6、8mL分别置于10ml的量瓶中,加甲醇稀释至刻度，黄芩苷、汉黄芩苷浓度分为为0.1～0.8mg·mL^-1，1.25～10.0μg·mL^-1,精密吸取10μL，按上述色谱条件，分别进样测定。以峰面积对应的质量浓度进行回归分析得：黄芩苷的质量浓度在0.1～0.8mg·mL^-1内峰面积与质量浓度线性关系良好，回归方程Y=780.23X-46.096,r=0.9992；汉黄芩苷的质量浓度在1.25～10.0μg·mL^-1内峰面积与质量浓度线性关系良好，回归方程Y=683.18X+0.0479,r=0.9994。

2.5 精密度试验

取2.2项下混合对照品溶液，按“2.1项下”色谱条件进样6次，分别记录黄芩苷、汉黄芩苷峰面积，计算RSD分别为0.03%、0.06%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批次的复方芩兰口服液（3批）6份,按“2.1项下”色谱条件进样6次,计算黄芩苷、汉黄芩苷峰面积的RSD分别为0.44%、0.42%，均小于2%，表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液,按2.1项下色谱条件操作,分别于0h、2h、4h、8h、12h和24h进样分析，计算黄芩苷、汉黄芩苷峰面积的RSD分别为0.64%、1.46%，均小于2%，表明供试品溶液在24h内相对稳定。

2.8 加样回收率试验

精密量取已知含量的复方芩兰口服液1mL，加入混合对照品溶液适量，按2.3项制成加标供试品溶液，按“2.1项下”色谱条件测定，计算回收率。黄芩苷、汉黄芩苷平均回收率分别为99.31%、95.32%，计算RSD分别为0.44%、1.20%，表明该方法测定结果准确可靠。

2.9 耐用性试验

检测波长分别调整为277nm和273nm、流速分别调整为0.8mL·min^-1和1.2mL·min

^-1、柱温由30℃分别调整为25℃和35℃、流动相比例分别调整为乙腈-0.05%磷酸溶液（32:68）和乙腈-0.05%磷酸溶液（28:72)，测定供试品中黄芩苷、汉黄芩苷含量，与“2.1项下”色谱条件测定结果进行统计分析，黄芩苷、汉黄芩苷含量RSD%分别为1.52%、1.87%，均小于2.0,表明该方法耐用性良好。

3.讨论

黄芩苷、汉黄芩苷分别于275、273nm波长处获得最大吸收峰，275nm处对黄芩素、黄芩苷峰面积未显示明显影响，本次实验将测定波长确定为275nm^[9]。结果表明:方法简便、准确，可作为复方芩兰口服液提升质量标准的参考依据。

参考文献

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［4］王艳春,张忠艳,姜小卓.中药黄芩的药理及应用[J].中外医疗,2009,28(13):158.

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［6］薛萍,沈晓燕,杨敏智.高效液相色谱法同时测定复方芩兰口服液中绿原酸等5种成分的含量[J].中国药品标准,2018,19(02):151-157.

［7］叶建晨.高效液相色谱法同时测定复方芩兰口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量[J].海峡药学,2012,24(11):74-76.

［8］张成志.高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J].时珍国医国药,2008(04):939-941.

［9］刘青青,王玉波,刘建伟,徐倩倩,张冉冉,王怡晴.同时测定黄芩提取液中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素含量的高效液相色谱方法的建立[J].滨州医学院学报,2020,43(01):54-57.